ELISA試劑盒陰性對照值偏高，核心原因是實驗體系出現了非特異性結合或污染，具體可分為以下幾類情況：
?? 試劑相關因素

1. 試劑盒本身質量問題

? 包被抗原/抗體純度不足，存在雜蛋白引發非特異結合

? 酶標二抗交叉反應性過高，與陰性樣本中無關蛋白結合

? 試劑保存不當（如反復凍融、溫度超標）導致成分變性

2. 試劑添加誤差

? 酶標試劑、底物溶液等加樣量超標，或出現孔間交叉污染

? 陰性對照孔誤加了陽性樣本、待測樣品殘留

?? 實驗操作與環境因素 

1. 操作不規范

? 洗滌步驟不充分，未徹di清除未結合的游離試劑

? 孵育溫度過高、時間過長，加劇非特異性結合

? 加樣時槍頭重復使用，造成樣本間交叉污染

2. 實驗耗材與環境問題

? 酶標板未充分包被或存在破損，出現非特異吸附

? 實驗環境中存在雜菌、灰塵，或洗液受污染

? 移液器、容器等未徹di清洗，殘留有蛋白類物質

?? 樣本相關因素

1. 樣本基質干擾

? 血清/血漿樣本中含有高濃度脂類、血紅蛋白、類風濕因子等

? 樣本發生溶血、凝固不全，釋放的內源性物質引發假陽性信號

2. 樣本處理不當

? 樣本保存時間過久、反復凍融，導致蛋白變性沉淀

? 樣本稀釋液選擇不當，未消除基質效應
?? 注意事項

若陰性對照值持續偏高，需先更換新批次試劑盒驗證，同時嚴格規范操作流程、排查實驗環境與耗材污染問題，必要時優化樣本前處理方法（如添加封閉劑、更換稀釋液）。